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1.故事发生在2004年，也就是《生化危机2》年后的六年。由于新闻媒体争相报道莱肯一家布雷拉公司的地下研究所，早前制造的t病毒泄露，导致生化危机。一系列负面消息导致公司股价暴跌。美国联邦政府在各国政府的压力下暂停了一家brera公司的业务，随后该公司宣布破产，所有地下研究中断，t病毒的传播被阻止。
2.这一次的主角是莱昂斯科特肯尼迪(Leon Scott Kennedy)，他是《生化危机2》年抵达莱肯的警察，现在是美国总统直接指挥下的绝密组织成员。里昂被派往欧洲的一个神秘村庄(可能是西班牙或苏格兰)去解救被绑架的格拉汉姆总统的女儿阿什利格雷厄姆。在得救的路上，他发现绑架阿什莉的是一个名为“Los Illuminados”(西班牙语：照亮之路)的神秘宗教团体。不要和光明会混淆)，领导者是奥斯曼萨德勒。
3.进入村庄后，一个神秘的人，路易斯塞拉，在村室被救出。就在这个时候，村长比特雷斯门德斯出现了。里昂和村长的战斗是如此的脆弱，里昂和路易都惊呆了。与此同时，奥斯穆德出现了，他给里昂注射了寄生虫“拉斯普拉加斯”。当里昂醒来时，他在山谷的另一边。他从路易斯那里得知艾希礼被关在村里的教堂里。他和路易避开了村民的攻击后，路易独自逃走了。里昂回到村里的教堂营救阿什利，并用强力武器击倒了村长，于是他离开了神秘的村庄，等待美国联邦政府派来的直升机，但大批村民赶到，于是里昂把阿什利带进了一座旧城堡。
4.里昂和阿什利遇到了拉蒙雷蒙萨拉查，堡垒的主人，他利用村民在地下矿井中挖掘寄生虫拉斯普拉加斯，并将其提供给洛斯Illuminados。在此期间，路易斯找到了可以帮助里昂和阿什莉解开身上寄生虫的药物和寄生虫样本。他曾经是Los Illuminados的研究员，但是关键时刻Osmud Saddler出现了，拿走了样本，杀死了路易。后来，里昂又遇到了艾达王。《生化危机2》后，他得知阿达是阿尔伯特威斯克派来的间谍，于是对阿达的再次出现充满怀疑，但阿达逃脱了。莱昂一直很在乎这个埋藏在他心底的女人。阿什利被萨拉扎俘虏，并被送往一个遥远的军事设施。莱昂击倒了萨拉扎，又遇见了艾达。艾达问英俊的里昂是否需要搭车，里昂带着尴尬的表情回答。
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